10X单细胞(10X空间转录组)scanpy做多样本整合的智慧(bbknn)

本文回顾了scanpy在处理10X单细胞数据时,如何使用Theingest函数进行多样本整合,尤其与Seurat方法的不同之处。强调了注释好的参考数据集在捕获生物学变异的重要性,并介绍了scanpy的透明工作流程,包括PCA、邻居查找等步骤。同时讨论了scanpy在整合中的特点,如简单透明、保持数据不变形以及解决标签映射问题。

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hello,大家好,今天我们来回顾一下,不讲新的东西,回顾一下scanpy做10X单细胞(10X空间转录组)多样本整合的方法,这个方法跟Seurat差别比较大,目前引用scanpy做多样本整合的文献还比较少,原因么,可能是seurat太过权威了吧,但是个人觉得还是很有智慧的,今天我们来回顾一下这个过程,探讨一下这里面需要注意的点。

首先来看看简介,The ingest function assumes an annotated reference dataset that captures the biological variability of interest.(这一句话就很重要,首先需要一个注释好的参考数据集,然后来“捕获”疾病样本的生物学变化) 。The rational(理论) is to fit a model on the reference data and use it to project new data(用参考数据集拟合一个model,从而来插入新的数据集). For the time being, this model is a PCA combined with a neighbor lookup search tree, for which we use UMAP’s implementation

这块儿需要注意了,做整合分析的时候,scanpy需要我们有一个注释好的data作为reference,从理性上讲应该这样,但很多时候我们用Seurat做整合用不到这个,个人欣赏scanpy的做法,更为理性。

一些特点

  • As ingest is simple and the procedure clear, the workflow is transparent and fast.
  • Like BBKNN, ingest leaves the data matrix itself
<think>嗯,用户想了解单细胞测序数据分析的方法、工具或教程。首先,我需要回忆一下单细胞测序的基本流程。根据引用内容,单细胞测序通常包括样本制备、文库制备、测序和初级分析、数据可视化和解读四个步骤。用户提到的数据分析应该是在测序之后的步骤,所以可能需要从初级分析开始讲起。 然后,用户可能对具体的分析流程和工具不太清楚。我需要整理一下常见的分析步骤,比如数据预处理、质量控制、标准化、降维聚类、细胞类型注释等。引用2中提到了细胞类型注释是一个难点,需要重点说明。还有引用3和4提到单细胞测序能分析肿瘤微环境和细胞异质性,可能用户对这些应用也感兴趣。 接下来,工具方面,常用的比如Seurat、Scanpy、Monocle等,这些工具在引用中虽然没有直接提到,但根据行业知识,这些是主流工具,应该推荐。同时,引用1提到寻因生物有数据分析能力,可能他们的平台有特定的工具,但用户可能更关注开源工具。 教程方面,引用2有手把手教分析的教程,可以推荐用户参考。另外,可能还需要提供一些学习资源,比如书籍、在线课程等,帮助用户系统学习。 用户的问题还提到生信分析流程,需要详细说明每个步骤的具体操作,比如从原始数据到表达矩阵,然后质控、标准化,再到聚类和注释。可能还需要提到高级分析,如拟时序分析、细胞通讯分析等,这些在引用3和4中提到的分子机制和肿瘤研究中应用较。 最后,要确保回答结构清晰,分步骤讲解,每个步骤中列出工具和方法,并附上教程资源。同时,注意引用相关文献,如引用2的教程和引用4的癌症研究应用,以增加可信度。</think>### 单细胞测序数据分析方法与工具指南 #### 一、核心分析流程 单细胞测序数据分析包含以下关键步骤,需结合生物信息学工具与统计方法: 1. **原始数据处理** - 数据格式转换:将测序仪生成的FASTQ/BAM文件转为基因表达矩阵 - 常用工具:`Cell Ranger`(10X Genomics官方流程)[^1]、`STARsolo`、`Alevin` 2. **质量控制与过滤** - 过滤低质量细胞:剔除线粒体基因占比>20%或总UMI<500的细胞 - 过滤环境RNA:使用`SoupX`或`DecontX` ```R # Seurat示例代码 pbmc[["percent.mt"]] <- PercentageFeatureSet(pbmc, pattern = "^MT-") pbmc <- subset(pbmc, subset = nFeature_RNA > 500 & percent.mt < 20) ``` 3. **数据标准化与整合** - 标准化方法:`SCTransform`(泊松回归标准化)、`LogNormalize` - 批次校正工具:`Harmony`、`BBKNN`、`scVI`[^2] 4. **降维与聚类** - 关键算法:PCA→UMAP/t-SNE→Louvain聚类 - 工具链:`Seurat`(R)、`Scanpy`(Python)实现端到端分析 $$ \text{UMAP}(X) = \arg\min \sum_{i<j} w_{ij} \log \frac{d_{ij}}{1 - d_{ij}}} $$ 5. **细胞类型注释** - 参考数据库:`CellMarker`、`PanglaoDB` - 自动化工具:`SingleR`、`SCINA`、`scCATCH`[^2] #### 二、高级分析方法 1. **轨迹推断** - 工具:`Monocle3`、`PAGA`、`Slingshot` - 应用场景:干细胞分化、癌细胞演化研究[^3] 2. **细胞通讯分析** - 互作数据库:`CellChatDB`、`CellPhoneDB` - 可视化工具:`NicheNet`、`CellCall` 3. **空间转录组整合** - 前沿工具:`Seurat v5`空间分析模块、`Squidpy` #### 三、推荐学习资源 1. **系统教程** - 官方文档:Seurat官网教程(含PBMC案例) - 书籍:《单细胞测序技术与应用》(科学出版社) 2. **实践平台** - 云分析平台:寻因生物单细胞云平台(含标准化流程)[^1] - 交互式学习:Google Colab+Scanpy教程 3. **前沿进展** - 肿瘤微环境研究:CDD Press最新单细胞技术综述[^4] - 组学整合:CITE-seq/DSP技术联合分析
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