Got (spinreact)

Got (spinreact)

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  GOT (AST) NADH. CinéticoUV. IFCC rec. BEDTT09 Ed.2003 SPINREACT,S.A. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected] GOT (AST) Determinación cuantitativa de aspartato aminotransferasa GOT (AST) IVD Conservar a 2-8ºC PRINCIPIO DEL METODO La aspartato aminotransferasa (AST) inicialmente llamada transaminasa glutamato oxaloacética (GOT) cataliza la transferencia reversible de un grupo amino del aspartato al α-cetoglutarato con formación de glutamato y oxalacetato. El oxalacetato producido es reducido a malato en presencia de malato deshidrogenasa (MDH) y NADH: Aspartato + α-Cetoglutarato Glutamato + Oxalacetato⎯⎯ →⎯ AST Oxalacetato + NADH + H + Malato + NAD⎯⎯⎯ →⎯ MDH + La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio, determinada fotometricamente, es proporcional a la concentración catalítica de AST en la muestra ensayada 1 . SIGNIFICADO CLINICO La AST es una enzima intracelular, se encuentra en niveles altos en el músculo del corazón, las células del hígado, las células del músculo esquelético y en menor cantidad en otros tejidos. Aunque un nivel elevado de AST en suero no es específico de enfermedad hepática se emplea principalmente para su diagnóstico y seguimiento, junto con otras enzimas como la ALT y ALP. También se utiliza en el control post-infarto, en pacientes con desordenes del músculo esquelético, y en otras afecciones 1,4,5 . El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio. REACTIVOS R 1 Tampón TRIS pH 7,8 L-Aspartato 80 mmol/L 200 mmol/L R 2 Substrato NADH Lactato deshidrogenasa (LDH) Malato deshidrogenasa (MDH) α-Cetoglutarato 0,18 mmol/L 800 U/L 600 U/L 12 mmol/L PREPARACION Reactivo de trabajo (RT): Ref: 1001160 Disolver ( ) una tableta de R2 Substrato en un vial de R1.→ Ref: 1001161 Disolver ( ) una tableta de R2 Substrato en 15 mL de R1.→ Ref: 1001162 Disolver ( ) una tableta de R2 Substrato en 50 mL de R1.→ Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. Estabilidad: 21 días a 2-8ºC o 72 horas a temperatura ambiente. CONSERVACION Y ESTABILIDAD Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar las tabletas si aparecen fragmentadas. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. Indicadores de deterioro de los reactivos: - Presencia de partículas y turbidez. - Absorbancias del Blanco a 340 < 1,00. MATERIAL ADICIONAL - Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm. - Baño termostatable a 25ºC, 30ºC ó 37ºC (± 0,1ºC) - Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. - Equipamiento habitual de laboratorio. MUESTRAS Suero o plasma 1 . Estabilidad de la muestra: 7 días a 2-8ºC. PROCEDIMIENTO 1. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .340 nm Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . 1 cm paso de luz Temperatura constante . . . . . . . . . . .. . . .25ºC / 30ºC / 37ºC 2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire. 3. Pipetear en una cubeta: RT (mL) 1,0 Muestra (µL) 100 4. Mezclar, incubar 1 minuto. 5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos. 6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (∆A/min). CALCULOS ∆A/min x 1750 = U/L de AST Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 1 µmol de substrato por minuto, en condiciones estándar. La concentración se expresa en unidades por litro (U/L). Factores de conversión de temperaturas Los resultados pueden transformarse a otras temperaturas multiplicando por: Factor para convertir aTemperatura de medición 25ºC 30ºC 37ºC 25ºC 30ºC 37ºC 1,00 0,73 0,48 1,37 1,00 0,65 2,08 1,54 1,00 CONTROL DE CALIDAD Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados: SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210). Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe revisar el instrumento, los reactivos y la técnica. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias. VALORES DE REFERENCIA 1 25ºC 30ºC 37ºC Hombres Hasta 19 U/L 26 U/L 38 U/L Mujeres Hasta 16 U/L 22 U/L 31 U/L Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. CARACTERISTICAS DEL METODO Rango de medida: Desde el limite de detección 5,44 U/L hasta el limite de linealidad 260 U/L. Si la concentración de la muestra es superior al limite de linealidad, diluir 1/10 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 10. Precisión: Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20) Media (U/L) 17,4 128 17,1 128 SD 0,68 1,35 0,72 1,28 CV (%) 3,91 1,05 4,20 0,99 Sensibilidad analítica: 1 U/L = 0,0017 ∆A/min. Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x). Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes: Coeficiente de regresión (r): 0,99 Ecuación de la recta de regresión: y= 0,96x + 1,33. Las características del método pueden variar según el analizador utilizado. INTERFERENCIAS Los anticoagulantes de uso corriente como la heparina, EDTA oxalato o fluoruro no afectan los resultados. La hemólisis interfiere con la determinación 1 . Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la determinación de la AST 2,3 . NOTAS SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este reactivo en distintos analizadores. BIBLIOGRAFIA 1. Murray R. Aspartate aminotransferase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1112-116. 2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995. 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001. 4. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999. 5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995. PRESENTACION Ref: 1001160 20 x 2 mL Ref: 1001161 10 x 15 mL Ref: 1001162 10 x 50 mL Cont.