Thibault vha vhe- du16

Virus de l'hépatite A et E
Virus et marqueurs diagnostiques
V.Thibault | janv.-16 1
Vincent THIBAULT
Laboratoire de Virologie
CHU de Rennes
2 rue Henri le Guilloux
35033 Rennes cedex 9
IRSET - INSERM U1085
Université Rennes 1
CENTRE
HOSPITALIER
UNIVERSITAIRE
DE RENNES
Hépatites virales
parentéral féco-oral
mode de transmission préférentiel
non A, non BB
1965 D
1977
A
1972
F, G, TTV, autres…
C
1990
E
1991
Vaccin
Vaccin
(Vaccin)

150
150
Historique VHA
Avant J.C.: “La Jaunisse” (Ikterus / kirrhos)
1745 : Cockayne, hépatites épidémiques
1908 : McDonald, "notion de virus…"
Reproduction de la maladie 1942 :
Volontaires (Voegt, Havens), Paul 1943 ingestion feces/serum
Entité clinique :
17-18ème siècle - 1923 Blumer - 1947 McCallum (VHA "infectious"-VHB "serum")
1995 : Vaccin
Transmission nosocomiale (préparation vaccinale : variole, fièvre jaune…)
Visualisation : 1973 (Feinstone)
Développement de la sérologie : épidémiologie
1979 : culture (Provost et Hilleman)
1981... : Clonage, Séquences nucléotidiques
1991… : Vaccination
2006 : Déclaration obligatoire
2015 : origine zoonotique du virus
1995 : Vaccin
1996 : recommandations
1999 : recommandations

VHA : physiopathologie
Absence d'effet cytopathique direct :
cytolyse résultant du processus immun
de défense de l'hôte,
médiation cellulaire
médiation humorale
Membrane hijacking by HAV blurs the
classic distinction between ‘enveloped’ and
‘non-enveloped’ viruses and has broad
implications for mechanisms of viral egress
from infected cells as well as host immune
responses.
Feng et al. 2013 Nature 496, 367
Agents Stabilité
Chaleur
Autoclavage (121°C, 20')
100°C
60°C
température ambiante
Inactivation
Inactivation
Stable 1 heure
Stable 1 mois (selles, eaux, sols)
Plusieurs jours sur surface sèche
4 h. Sur les mains
Propriétés Physiques du VHA
4°C
Congelé
4 h. Sur les mains
Stable plusieurs mois
Stable des mois ou années
Acide-base pH 1 : stable 5 h.
PH 3-11 : stable au moins 30'
U.V. Inactivation
Chimiques
Chlore, ozone,
glutaraldéhyde, iode
Inactivation
Alcool 70° 3' : inactivation partielle

VHA et agents physiques ou chimiques
http://www.invs.sante.fr/publications/2009/guide_hepatite_a
Variabilité génétique
Comparaison nucléotidique
6 Génotypes : IA,B ; II; IIIA,B ; IV-VI
⌦Homme : génotype I (90%), (III, II)
3D (POL)3C (PRO)2C2B1D1C1B 3
A-B
2A
P1 prot. Capside
Vpg
2.5kDa
P2 P3
0 7478
1A
AAA
Structurales Non structurales
⌦Homme : génotype I (90%), (III, II)
⌦Singes : IV, V, VI
Sérotype unique
⌦Nombre limité d'épitopes antigéniques VP1, VP3
⌦Tests immunologiques
⌦Vaccination (HM175, CR326)
virus inactivé cultivé sur MRC-5

Origine du VHA : petits animaux ?
Chauve-souris
Rongeurs
Hérissons
Musaraignes
Chauve-souris
Rongeurs
Hérissons
Musaraignes
Drexler et al. PNAS December 8, 2015; 49; 15190–15195
Répartition mondiale des génotypes
Génotypes infectant l'homme en noir , les singes en rouge.
Souche PA21 (génotype IIIA), isolée d'un singe Panamanian Owl en vert.
Cristina J, Costa-Mattioli M. Virus Res. 2007 Aug;127(2):151-7.

Genetic Characterization of
Hepatitis A genotypes
G. Vaughan et al. Infection, Genetics and
Evolution 21 (2014) 227–243
IA
IB
IIB
Autochtones
Diffusion du génotype IIA en
France à partir d'une origine
Epidemiology and Genetic
Characterization of Hepatitis
A Virus Genotype IIA
Desbois et al. J CLIN MICROBIOLOGY,
2010, 48, 9:3306–3315
IIA
IIIB
IIIA
VP1 sequences (900 nt.)
West Africa
Autochtones
France à partir d'une origine
Africaine

Génotypes et sévérité de l'hépatite
Hepatitis A Virus Genotype and Its Correlation With the Clinical
Outcome of Acute Hepatitis A in Korea: 2006–2008
Globalement, pas de consensus pour un lien direct entre le
génotype et la sévérité de l'atteinte hépatique –
Données en faveur de facteurs liés à l'hôte (TIM-HAVCR).
Outcome of Acute Hepatitis A in Korea: 2006–2008
Yun et al. J. Med. Virol. 83:2073–2081 (2011)
•n=556 (497 ARN positifs) Sept. 2006 à Août 2008
•Génotype IIIA induit des symptômes plus sévères
Comparative Analysis of Disease Severity Between Genotypes IA
and IIIA of Hepatitis A Virus
Yoon et al. J. Med. Virol. 83:1308–1314 (2011)
•n=111, comparaison de deux périodes 1998 et 1999 (IA) (n = 45) et 2009
(IIIA) (n = 66)
•IIIA plus sévère (ALAT et durée hospitalisation)
Symptomes
Ictère
VHA : Paramètres Biologiques
Ag foie IgG
protection contre réinfection
Ac anti-VHA = hépatite A ancienne ou vaccination
IgM anti-VHA = hépatite aiguë A (clinique)
Ictère
Semaines
VHA Sang
VHA Selles
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 24
IgM

IgM HAV uniquement à bon escient !
11 %
1 %
Alaska : test "réflexe" si Ig-VHA totales + Ig M HAV
⌦32 % de faux + (Castrodale CID 2005:41;e86)
Vaccination : 8 à 20 % d'IgM VHA + dans les 2 à 3 semaines suivant l'injection…
Roque Afonso et al. CID 2006:42 -887
82 %
11 %
Faux positifs
NE RECHERCHER L'IgM anti-VHA QU'EN CAS D'HEPATITE AIGUË
Elaine Tennant and Jeffrey J. Post
Production of False-Positive Immunoglobulin M Antibodies to Hepatitis A Virus in
Autoimmune Events J Infect Dis. (2016) 213 (2): 324-325
Elaine Tennant and Jeffrey J. Post
Production of False-Positive Immunoglobulin M Antibodies to Hepatitis A Virus in
Autoimmune Events J Infect Dis. (2016) 213 (2): 324-325
IgM HAV :
A répéter, parfois…
Lee HK et al. Eur J Gastroenterol
Hepatol. 2013 ;25(6):665-8

Diagnostic
Sérologie +++
IgM anti VHA : infection récente
IgG anti VHA : infection passée ou vaccination
Marqueurs biochimiques
⌦ Transaminases (ALAT, ASAT)
⌦ Bilirubine
⌦ Phosphatase alcaline
⌦ Facteurs de coagulation
IgG anti VHA : infection passée ou vaccination
IgM et IgG anti VHA
Diagnostic direct (-) [uniquement dans le cadre d'études]
Virémie : techniques sensibles (105 v./mL)
Recherche de virus dans les selles, prolongée, importante
(109v./mL), épidémiologie
Salive :
IgG (ELISA)
Génome viral (RT-PCR)
Durée de la virémie: conséquences cliniques et biologiques
Duration of viremia in hepatitis A virus
infection
Bower et al. Journal of Infectious Diseases
2000;182:12–7
6-7 5-6 2-5 Log particules/mL
Suivi de 13 patients : durée moyenne 95 jours
dont 2 avec rechute (1-2 mois)
Suivi de 27 patients
High and Persistent Excretion of Hepatitis A
Virus in Immunocompetent Patients
Tjon et al.
Journal of Medical Virology 78:1398–1405 (2006)

Limite de
quantification
Quantification de la virémie ?
Rezende et al., Hepatology 38:613-618 (2003)
Hépatite fulminante Evolution bénigne
50 Hépatites A dont 19 fulminantes (10 OLT)
Hépatite fulminante :
-virémie (p=0.03) *
-bilirubine -(p=0.04) *
-age (p=0.09)
-génotype non IA (p=0.09)
Fujiwara K et al.
J. Med Virol. 2011 Feb;83(2):201-7.
Hepatitis A viral load in relation to
severity of the infection.
11 patients with fulminant hepatitis
10 with severe acute hepatitis
70 with self-limited acute hepatitis
Hépatite A : le vaccin
virus inactivé
AVAXIM 160U suspension injectable seringue préremplie
⌦ Virus de l'hépatite A souche GBM cultivée sur cellules diploïdes humaines MRC-5 ,
inactivé
HAVRIX 1 440 U Elisa/ml susp inj IM Ad en seringue
HAVRIX 720 U Elisa/0,5 ml susp inj IM Enf/Nour en seringue
⌦ Souche HM 175 du virus de l'hépatite A cultivée sur cellules humaines diploïdes
MRC5MRC5
Le schéma vaccinal habituel comprend 1 dose suivie d'un rappel (1 dose) 6 à
12 mois plus tard.
La persistance des anticorps anti-VHA après vaccination n'est
actuellement pas connue . Les données disponibles suggèrent la persistance
des anticorps anti-VHA à un niveau protecteur au moins jusqu'à 20 ans
après primo-immunisation.
Hepatitis A Vaccine versus Immune Globulin for Post-exposure Prophylaxis
Victor et al. 2007 N Engl J Med 357;17

Grippe
SRAS ?
Hépatite E ?Hépatite E ? GrippeHépatite E
Historique VHE
Découverte dépendante de la connaissance des virus des hépatites
⌦1955 : Inde, hépatite chez des personnes immunisées contre le
VHA, épidémie particulière. "NANBH"
Entité clinique 1980 - similitude avec l’hépatite A :
Inde : prévalence de l’hépatite A importante
Epidémie : autre virus des hépatites, contamination par l’eau
1983 : reproduction de l’hépatite non A-non B chez un volontaire
immunisé contre VHA (Balayan)
Hépatite à J36
J28-45, visualisation de particules virales > VHA (27-30nm)
Reproduction de l’infection chez le singe (cynomolgus)
Hépatite "non A - non B" à transmission entérique (ENANB)
1990 : Reyes et al. clonage et séquençage "VHE"
1991 : Tam et al. VHE
2000 : Panda et al. cDNA infectieux

Hepatitis E Virus in Pork Liver Sausage, France
Hepatitis E virus (HEV) particles in the cell culture supernatant of pork liver sausage sample
Berto et al. Emerg Infect Dis 2013 Feb . http://dx.doi.org/10.3201/eid1902.121255
VHE Virus non enveloppé
Sphérique (SRV)
Surface irrégulière
Capside 27-34 nm
Symétrie icosaédrique
ARN simple brin
hélice droite
Famille : Hepeviridae
Genre : Hepevirus
hélice droite
polarité +
7,5kb
poly-A extrémité 3’
Stabilité
Au laboratoire : instable(-70 à +8°C)
Décongélation/congélation
Tractus GI : stable (pH)

Structure of the hepatitis E virus-like particle
(VLP) (T = 1)
Tom S. Y. Guu et al. PNAS 2009;106:12992-12997
Résistance thermique du VHE…
VHE dans des suspensions fécales :
Inactivation : 70°C 10' ou 95°C 1 min;
56 °C 30 min maintien de l'infectiosité
Tanaka et al. J. Gen Virol. 2007
Colson et al. JID 2010:202
Barnaud et al. August 2012 Volume 78 Number 15 Applied and Environmental Microbiology p. 5153–5159

Organisation génomique
Non structurales Structurales
28 5109 71245’ NC
3’NC
Poly-A
ARN polarité +7 200 nt
Protéines
MeT Y Pro P X Hel RdRp
ORF3
ORF2 (core-CRE)
Génotypes 1-4
5109
5123
114 AA
660 AA
Hétérogénéité génétique
Au moins 4 groupes majeurs (<20% hétérogénéité ORF2) subdivisés
en 24 sous groupes dont homologues animaux
Epitopes majeurs : parties C-ter de l’ORF3 et ORF2 (aa 452-617)
Protection croisée entre différentes souches : un seul sérotype
⌦ Développement de tests sérologiques (performances équivalentes entre
les différents types ?)
⌦ Vaccin : ORF 2 recombinante
Protéines
immunogènes
DIAGNOSTIC
Vaccin
Génotypes 1-4
Etudes des souches de l'homme et du porc en France
Bouquet et al. Emerging Infectious Diseases Vol. 17, No. 11, November 2011

Homologie des souches de
l'homme et du porc
Bouquet et al. Emerging Infectious Diseases Vol. 17, No. 11, November 2011
Phylogenetic tree based on full-length sequences of HEV strains.
Kamar et al. Clinical Microbiology
Reviews 2014 p. 116–138

Transmission inter-espèces Ne mangez
pas de
gerbilles !
R. Johne et al. / Infection, Genetics and Evolution 27 (2014) 212–229
Répartition des différents génotypes
Aggarwal Hepatology 2011

Evolution VHE
Anthropotropic
Purdy MA, Khudyakov YE. Evolutionary history and population
dynamics of hepatitis e virus. PLoS One. 2010 Dec 17;5(12):e14376.
enzootic
536 to 1344 years ago
Evolution VHE
Anthroponose
Grandes épidémies + cas sporadiques
Pays en voie de développement
Eau de boisson (moussons)
Rares en France
Symptomatiques
Mortalité chez la femme enceinte
Pays industrialisés
Cas autochtones
Nourriture (eau ?)
Asymptomatique++
Séroprévalence croissante
Purdy MA, Khudyakov YE. Evolutionary history and population
dynamics of hepatitis e virus. PLoS One. 2010 Dec 17;5(12):e14376.
Zoonose
536 à 1344 ans
Séroprévalence croissante
avec âge
Graves sur hépatopathie
Pas de cas sévère chez femme
enceinte
Formes persistantes chez
l'immunodéprimé
Atteintes neurologiques (5.5%)

Distribution aléatoire des souches FH (noir)
et des souches non FH
Variants viraux et sévérité de l'hépatite
Un génotype plus sévère ?
Jeblaoui et al. Clinical Infectious Diseases 2013;57(4):e122–6
Smith & Simmonds, Liver International 2014
DOI:10.1111/liv.12629
et des souches non FH
(A) Génotype 1
(B) Génotype 4
Génotype 3 et sévérité
In conclusion, we find no evidence to
support the hypothesis that the
In conclusion, we find no evidence to
Distribution aléatoire des souches
donneurs de sang (noir)
Hépatite aiguë (rond blanc)
Smith et al. / Journal of General Virology (2015),
96, 3255–3264
pathogenesis of HEV-3 infection is virus
dependent.
pathogenesis of HEV-3 infection is virus
dependent.

• Culture
Difficile
Culture primaire d’hépatocytes de macaques (cynomolgus)
Cellules PLC/PRF/5 hépatocarcinome et "A549" cellules
cancer poumon (Tanaka et al. J. Gen Virol. 2007; Takahashi et al. Arch. Virol. 2012)
Cellule embryonnaire
Identification de recombinants virus/hôte
Culture et Modèles animaux
• Modèles animaux
Primates : reproduction de la pathologie humaine
Volontaires...
VHE du porc, du poulet
Présence d’Ac chez poulet, porc, rat, souris, mouton...
Lapin… Ma H et al. Experimental infection of rabbits with rabbit and genotypes 1
and 4 hepatitis E viruses. PLoS One. 2010 Feb 11;5(2):e9160
Cycle du VHE, formes virales enveloppées
I. Ahmad et al. / Virus Research 161 (2011) 47– 58

Efficacité des antiviraux
Bonne efficacité de la ribavirine… et potentialité du sofosbuvir
Dao et al. / Gastroenterology 2016;150:82–85
The anti-HEV activity of SOF IC50, (1.2
µmol/L) is markedly less pronounced than the
anti-HCV activity of the compound (IC50
range, 0.014–0.11 µmol/L depending on
replicon genotype
The anti-HEV activity of SOF IC50, (1.2
µmol/L) is markedly less pronounced than the
anti-HCV activity of the compound (IC50
range, 0.014–0.11 µmol/L depending on
replicon genotype
Synergie Sofosbuvir-Ribavirine
Dao et al. / Gastroenterology 2016;150:82–85

Symptomes
Ictère
VHE : Paramètres Biologiques
IgG
Titre peu élevé
protection contre réinfection ?
Khuroo MS, Khuroo MS.
Seroepidemiology of a second epidemic of hepatitis
E in a population that had recorded first epidemic
30 years before and has been under surveillance
since then.
Hepatol Int. 2010 Feb 3;4(2):494-9
Ictère
Jours
VHE Sang
VHE Selles
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 200
IgM
Une virémie prolongée
Hogema et al. TRANSFUSION 2016; accepted

HEV – virémie-
transmission
serum
salive
selle
IgG
Concentré de plaquettes à J0
Transfusé à un homme de 64
ans traité pour Lymphome
non-Hodgkinien par GM
autologue
Matsubayashi K, et al. Transfusion.
2008 Jul;48(7):1368-75.
IgM
Infectiosité des urines
[Macaques]
Et atteintes rénales ?Et atteintes rénales ?
Geng et al. / Journal of Hepatology 2016 vol. 64 ; 37–43

Immunodépression, hépatite chronique et
stratégie diagnostique
Kamar et al. American Journal of Transplantation 2008; 8: 1744–1748
Dans le cadre d'une investigation chez un patient immuno déprimé,
La détection du génome viral (RT-PCR) sera privilégiée !
(ceci s'applique pour de nombreux diagnostics viraux - PCR)
Suivi du traitement
1
2
3
4
5
6
7
8
CVVHElogCopies/mL
seuil de quantification
Détectable Détectable
RIBAVIRINE
Abravanel et al. CID 2015:60 (1 January)
0
1
Dates
Suivi charges virales plasmatiques VHE
Valeur prédictive de la détection d'ARN dans les selles 3 mois après le début de
la ribavirine : rechute ?

Suivi de la charge virale
Kamar et al. / Transplantation 2015;99: 2124–2131
Stratégie Diagnostique Pratique
Hépatite aigue sans immunosuppression
1. IgM anti-VHE
Délai d'obtention du résultat rapide
2. Recherche du génome du VHE (Sang et Selles)
Amélioration et standardisation des tests
Hépatite dans un contexte d'immunosuppressionHépatite dans un contexte d'immunosuppression
1. Recherche du génome du VHE (Sang et Selles)
⇒ hépatite chronique, fibrose
2. Eventuellement quantification ARN-VHE : suivi du traitement
3. Marqueurs sérologiques sans intérêt clinique
Recherche d'anticorps (IgG) anti-VHE
Intérêt ?
Fiabilité des tests ? (analyse de la littérature…)

Influence des tests...
Test Wantai
Test Genelabs
GL : 3.6%
Wantai: 16.2%
Séroprévalence VHE
500 don. Sang (UK)
0.25 2.5
Bendall et al. 2010 J. Med. Virol. 82:799-805
Marseille : 64 transplantés (reins, foie)
•Test Adaltis : 10.9% positifs (86% immunoblots +)
•Test Wantai : 31.3% positifs (80% immunoblots +)
Rossi-Tamisier et al. 2013 J. Clin. Virol. 56:62-64
Toulouse : 88 greffe de moelle
•Test Adaltis : 12.5% positifs
•Test Wantai : 36.4% positifs
Abravanel et al. 2012 J. Clin. Virol. 54:152-155
Corée : 147 bilans de santé
•Test Genelabs: 14.3% positifs
•Test Wantai : 23.1% positifs
Park et al. 2012 BMC Inf. Dis. 12:142
Question de sensibilité :
séroprévalence de 26,6 à 46,7% [Matlab, Bangladesh]
Kmush et al. / Am. J. Trop. Med. Hyg., 93(4), 2015, pp. 714–717

Un diagnostic rapide et prédictif (NPV)
Analyse de 60 échantillons de patients récemment infectés dont 30
immunodéprimés
Bonne performance du test rapide mais recours à la biologie
moléculaire indispensable chez l'immunodéprimé
F. Abravanel et al. / Journal of Clinical Virology 70 (2015) 101–104
En Pratique
(à adapter en fonction du lieu géographique ?)
Hépatite aiguë
IgM VHA et VHE
IgM HBc – AgHBs
Hépatite C
Notions sérologiques pour d’autres virus (EBV, CMV, herpès)
Symptomatologie neurologique inexpliquée
IgM VHE et RT-PCR VHEIgM VHE et RT-PCR VHE
Immunodépression et cytolyse persistante
RT-PCR VHE (sang et selles)
Hépatite B – Hépatite C
Autres causes
Suivi des traitements
Virémie quantitative
Recherche de d'ARN VHE dans les selles

Stratégie Diagnostique
Se donner les moyens de faire le diagnostic
Diagnostic IgG IgM RT-PCR
Diagnostic Direct
Recherche du génome sur
prélèvements sang et selles
Diagnostic Indirect
Recherche de l'immunité antivirale
IgM anti VHE
IgG anti VHE
Diagnostic IgG IgM RT-PCR
Certain +/- ++ +
Probable +/- - +
Douteux +++ - -
Immunité
ancienne
+ - -
Huang S et al. 2010 Profile of Acute Infectious Markers
in Sporadic Hepatitis E. PLoS ONE 5(10): e13560
VHE et traitement
Efficacité du PEG-IFN
Efficacité de la ribavirine chez les patients
⌦Pas de mécanisme virologique précis décrit
Haagsma EB et al Liver Transpl. 2010 Apr;16(4):474-7
Mallet V et al. Ann Intern Med. 2010 Jul 20;153(2):85-9.
Kamar N et al. Nephrol Dial Transplant. 2010 Aug;25(8):2792-5.
Kamar N et al. Gastroenterology. 2010 Nov;139(5):1612-8.

Protéines et vaccins
Baculovirus
S. Kamili / Virus Research 161 (2011) 93– 100
Baculovirus
GlaxoSmithKline
E. coli
Hecolin;
Xiamen Innovax Biotech
VHE et vaccination
Moyenne géométrique du taux
d'anticorps anti-VHE
20 μg d'antigène rHEV (capside exprimée
dans baculovirus) dans 0.5 ml de PBS sur
0.5 mg d'hydroxyde d'aluminium.
3 injections
Risque cumulé d'un premier épisode
d'hépatite E
Shrestha,et al 2007 N Engl J Med 356;9
Efficacité : 95,5% après 3 doses
Incidence :
•Placebo : 66/896=7.37%
•Vaccin : 3/898=0.33%

VHE et vaccination
HEV 239 (Hecolin; Xiamen Innovax Biotech,
Xiamen, China), produced in bacterial cells :
safe and efficacious against infection with
hepatitis E virus in seronegative participants in
a phase 2 trialIncidence :
•Placebo : 15/48 663=0.031%
•Vaccin : 0/48 693
Zhu et al Lancet. 2010 Sep 11;376(9744):895-902
Difficultés diagnostiques
http://www.invs.sante.fr/Espace-professionnels/Centres-nationaux-de-reference/Liste-et-coordonnees-des-CNR

Thibault vha vhe- du16

Contenu connexe

Tendances

Similaire à Thibault vha vhe- du16

Plus de odeckmyn

Dernier

Thibault vha vhe- du16