Thibault Vha Vhe Virus Et Marqueurs (1)

Virus de l'hépatite A et E Virus et marqueurs diagnostiques Vincent THIBAULT Laboratoire de Virologie Groupe Hospitalier Pitié-Salpêtrière Assistance Publique Hôpitaux de Paris

Hépatites virales parentéral non A, non B féco-oral mode de transmission préférentiel B 1965 D 1977 A 1972 F, G, TTV, autres… C 1990 E 1991

Historique VHA “ La Jaunisse” 1745 : Cockayne, hépatites épidémiques 1908 : McDonald, "notion de virus…" Reproduction de la maladie 1942 : volontaires (Voegt, Havens), Paul 1943 ingestion feces/serum Entité clinique : 17-18ème siècle - 1923 Blumer - 1947 McCallum (VHA "infectious" -VHB "serum" ) Visualisation : 1973 (Feinstone) Développement de la sérologie : épidémiologie 1979 : culture (Provost et Hilleman) 1981... : Clonage, Séquences nucléotidiques 1991…: Vaccination 2006 : Déclaration obligatoire

Virus de l’Hépatite A ARN (+) Vpg Capside 27-32nm Famille : Picornaviridae (entérovirus type 72) Genre : hépatovirus Taille 27-32 nm Non enveloppé, Structure icosaèdrique ARN simple brin, polarité positive lié de façon covalente à une protéine Vpg

3D (POL) 3C (PRO) 2C 2B 1D 1C 1B 3 A-B 2A P1 prot. Capside Vpg 2.5kDa P2 P3 0 7478 1A AAA Structurales Non structurales IRES Traduction         VP1 VP3 VP2 VP4 2A Protéines de surface immunogénicité 3D (POL) 3C (PRO) 2C 2B VP1 VP3 VP2 3 A-B VP4 2A poly- protéine 2 227 AA ? Liaison NTP Hélicase Vpg Protéase ARN Polymérase Réplication VP1 VP3 VP2 VP4 2A VP0 Maturation finale X5 – X12

Cycle de multiplication du VHA en culture de cellules Relargage Membrane cellulaire Réticulum endoplasmique Espace de Disse Canalicule biliaire P3 P2 P1 Traduction Synthèse de la polyprotéine + - - + Réplication Maturation Libération du génome Attachement Empaquetage

VHA : physiopathologie Absence d'effet cytopathique direct : cytolyse résultant du processus immun de défense de l'hôte, médiation cellulaire médiation humorale

Propriétés Physiques du VHA Virus très Stable HYGIENE

Variabilité génétique Comparaison nucléotidique 7 Génotypes : IA,B ; II; IIIA,B ; IV-VII Homme : génotype I (90%), (III, II=VII) Singes : IV, V, VI Sérotype unique Nombre limité d'épitopes antigéniques VP1, VP3 Tests immunologiques Vaccination (HM175, CR326) virus inactivé cultivé sur MRC-5 3D (POL) 3C (PRO) 2C 2B 1D 1C 1B 3 A-B 2A P1 prot. Capside Vpg 2.5kDa P2 P3 0 7478 1A AAA Structurales Non structurales

Génotypes et phylogénie IV Nonhuman primate, Philippines V Nonhuman primate, Kenya VI Nonhuman primate, Indonesia D'après Nainan et al. 2006 Clin. Microb. Rev. ; 19:63-79 Phylogenetic analysis of 3,582 HAV isolates in the VP1/P2B region (315-bp fragment). VP1/P2A Génotypes : >15% variations Sous types : 7.5% variations

Répartition mondiale des génotypes Génotypes infectant l'homme en noir , les singes en rouge . Souche PA21 (génotype IIIA), isolée d'un singe Panamanian Owl en vert . Cristina J, Costa-Mattioli M. Virus Res. 2007 Aug;127(2):151-7.

VHA : épidémiologie http://wwwn.cdc.gov/travel/image.ashx?i=255

VHA : Paramètres Biologiques Semaines 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 24 protection contre réinfection Ac anti-VHA = hépatite A ancienne ou vaccination IgM anti-VHA = hépatite aiguë A (clinique) Symptomes Ictère Ag foie VHA Sang VHA Selles IgM IgG

VHA : Marqueurs disponibles 1- Sang : Marqueurs indirects IgM IgG Génome viral (RT-PCR) 10 5 virions/mL sang 3- Milieux : Génome viral (RT-PCR) Particules virales IEM 4- Foie : Ag viral à la surface des hépatocytes Génome viral : hybridation, RT-PCR 2- Selles : 10 9 virions/g selles Génome viral (RT-PCR) - épidémiologie Particules virales IEM - EIA Salive : IgG (ELISA) Génome viral (RT-PCR) Marqueurs indirects (+++) (ELISA) Marqueurs directs (plus spécialisé)

IgM HAV uniquement à bon escient ! Alaska : test "réflexe" si Ig-VHA totales +  Ig M HAV 32 % de faux + (Castrodale CID 2005:41;e86) Vaccination : 8 à 20 % d'IgM VHA + dans les 2 à 3 semaines suivant l'injection… NE RECHERCHER L'IgM anti-VHA QU'EN CAS D'HEPATITE AIGUË Roque Afonso et al. CID 2006:42 -887 82 % 11 % 1 % Faux positifs

Diagnostic Sérologie +++ IgM anti VHA : infection récente IgG anti VHA : infection passée ou vaccination IgM et IgG anti VHA Diagnostic direct (-) [uniquement dans le cadre d'études] Virémie : techniques sensibles (10 5 v./mL) Recherche de virus dans les selles, prolongée, importante (10 9 v./mL), épidémiologie Marqueurs biochimiques Transaminases (ALAT, ASAT) Bilirubine Phosphatase alcaline Facteurs de coagulation

Hépatite A : le vaccin virus inactivé AVAXIM 160U suspension injectable seringue préremplie Virus de l'hépatite A souche GBM cultivée sur cellules diploïdes humaines MRC-5 , inactivé HAVRIX 1 440 U Elisa/ml susp inj IM Ad en seringue HAVRIX 720 U Elisa/0,5 ml susp inj IM Enf/Nour en seringue Souche HM 175 du virus de l'hépatite A cultivée sur cellules humaines diploïdes MRC5 Le schéma vaccinal habituel comprend 1 dose suivie d'un rappel (1 dose) 6 à 12 mois plus tard. La persistance des anticorps anti-VHA après vaccination n'est actuellement pas connue . Les données disponibles suggèrent la persistance des anticorps anti-VHA à un niveau protecteur jusqu'à 10 ans (20 ans ?) après primo-immunisation. Hepatitis A Vaccine versus Immune Globulin for Post-exposure Prophylaxis Victor et al. 2007 N Engl J Med 357;17

Difficultés diagnostiques En routine · Adresser prélèvements au Centre national de référence du VHA Pr E Dussaix Laboratoire de virologie Hôpital Paul Brousse 12-14 av Paul Vaillant Couturier 94804 Villejuif cedex Tel : 01 45 59 37 21 http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste

Grippe aviaire ? SRAS ? Hépatite E ? Hépatite E ?

Historique VHE Découverte dépendante de la connaissance des virus des hépatites 1955 : Inde, hépatite chez des personnes immunisées contre le VHA, épidémie particulière. "NANBH" Entité clinique 1980 - similitude avec l’hépatite A : Inde : prévalence de l’hépatite A importante Epidémie : autre virus des hépatites, contamination par l’eau 1983 : reproduction de l’hépatite non A-non B chez un volontaire immunisé contre VHA (Balayan), Hépatite à J36 J28-45, visualisation de particules virales > VHA (27-30nm) Reproduction de l’infection chez le singe ( cynomolgus ) Hépatite nonA-nonB à transmission entérique (ENANB) 1990 : Reyes et al . clonage et séquençage  "VHE" 1991 : Tam et al . VHE 2000 : Panda et al. cDNA infectieux

VHE Virus non enveloppé Sphérique (SRV) Surface irrégulière Capside 27-34 nm Symétrie icosaédrique ARN simple brin hélice droite polarité + 7,5kb poly-A extrémité 3’ Stabilité Au laboratoire : instable(-70 à +8°C) Décongélation/congélation Tractus GI : stable (pH) Famille : Hepeviridae Genre : Hepevirus

Organisation génomique Hétérogénéité génétique Au moins 4 groupes majeurs (<20% hétérogénéité ORF2) subdivisés en 24 sous groupes dont homologues animaux : Epitopes majeurs : parties C-ter de l’ORF3 et ORF2 Protection croisée entre différentes souches : un seul sérotype Développement de tests sérologiques (performances équivalentes entre les différents types ?) Vaccin : ORF 2 recombinante Non structurales Structurales 28 5109 7124 5’ NC 3’NC Poly-A ARN polarité + 7 200 nt Protéines immunogènes DIAGNOSTIC MeT Y Pro P X Hel RdRp ORF3 ORF2 Génotypes 1-3

Hétérogénéité génétique Au moins 4 groupes majeurs (<20% hétérogénéité ORF2) subdivisés en 24 sous groupes dont homologues animaux : I- Birmanie et certaines souches africaines et asiatiques II- Mexique et certaines souches du Niger III- Amérique, Italie, NZ, Autriche, Grèce, Argentine (+ souches porcines) IV- Chine, Taiwan et Japon (plus sévère que III ?) Epitopes majeurs : parties C-ter de l’ORF3 et ORF2 Connaissances limitées sur l’immunité contre les Ag natifs Parties structurales variables Grande homologie des parties non structurales Protection croisée entre différentes souches : un seul sérotype Développement de tests sérologiques (performances équivalentes entre les différents types ?) Vaccin : ORF 2 recombinante

301 nt 5' end of ORF2 sequences from 275 HEV strains, 1 2 3 4 1a 1b 1c 1e 1d 0.05 4d 4c 4b 4a 4e 3f 3e 3c 3d 3b 3a D'après Lu et al. Rev. Med. Virol. 2006;16:5-36 Inde, Népal, Birmanie, Japon, Espagne Chine, Pakistan, Bengladesh Chine, Inde, Nepal, Russie Maroc, Algérie Algérie, Namibie, Afrique C. Mexico, Nigeria US, Japon, Corée, NL + porc Japon + porc NL (porc) Taiwan (porc) France, UK, Japon, Espagne + porc Espagne, UK, Grèce, NL, Japon + porc Chine, Taiwan Chine, Taiwan Japon, Vietnam Chine (porc) Inde (porc) Génotype < 20% hétérogénéité ORF2

Similarités des souches humaines et animales Borgen et al. BMC Infectious Diseases 2008, 8 :61 Genetic relatedness between HEV strains from human and non-human sources and from various countries . Minimal spanning trees of 81 sequences of 148 nucleotides HEV RNA showing genetic distances between genotype 3 HEV strains from humans and animals. Dutch cases are marked with ID numbers inside the colored circles.

Culture et Modèles animaux Culture Difficile Culture primaire d’hépatocytes de macaques (cynomolgus) Cellules PLC/PRF/5 hépatocarcinome (Tanaka et al. J. Gen Virol. 2007) Cellule embryonnaire Modèles animaux Primates : reproduction de la pathologie humaine Volontaires... VHE du porc, du poulet Présence d’Ac chez poulet, porc, rat, souris, mouton...

HEV – virémie- transmission Matsubayashi K, et al. Transfusion. 2008 Jul;48(7):1368-75. Concentré de plaquettes à J0 Transfusé à un homme de 64 ans traité pour Lymphome non-Hodgkinien par GM autologue serum salive selle IgG IgM

VHE : Paramètres Biologiques Jours 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 200 Titre peu élevé protection contre réinfection ? Symptomes Ictère VHE Sang VHE Selles IgM IgG

Marqueurs non biologiques circonstances de la maladie (voyage, autres causes, épidémie) A adapter en fonction de la zone géographique ? (Sud versus Nord ?) clinique : hépatite “classique”, absence de chronicité ( chez l'immunocompétent ! ) Absence de marqueurs biologiques : diagnostic d'exclusion Absence des marqueurs des virus des autres hépatites (A, B, C, D) Notions sérologiques pour d’autres virus (EBV, CMV, herpès) Marqueurs sérologiques spécifiques IgM anti-HEV IgG anti-HEV (+++) RT-PCR : détection du génome viral (sang, selles) Stratégie Diagnostique

Spécificité et Sensibilité des ELISAs Epidémie Indonésie, 82 symptomatiques; 174 asymptomatiques; 496 contrôles Comparaison de 5 tests sérologiques Référence = RT-PCR Concordance IgM : 81% Concordance IgG : 85% Myint et al. JCM, 2006, p. 1581–1583

Performance des tests J. Izopet Comm. Pers. CVV 2008 Panels 50 sérums ARN HEV (+), G3 406 sérums IgG ARN HEV (-)

Stratégie Diagnostique Se donner les moyens de faire le diagnostic Diagnostic Direct Recherche du génome sur prélèvements sang et selles Diagnostic Indirect Recherche de l'immunité antivirale IgM anti VHE IgG anti VHe - - + Immunité ancienne - - +++ Douteux + - - ou + Probable + ++ ++ Certain RT-PCR IgM IgG Diagnostic

Immunodépression, hépatite chronique et stratégie diagnostique Kamar et al. American Journal of Transplantation 2008; 8: 1744–1748

VHE et vaccination Risque cumulé d'un premier épisode d'hépatite E Moyenne géométrique du taux d'anticorps anti-VHE 20 μg d'antigène rHEV (capside exprimée dans baculovirus) dans 0.5 ml de PBS sur 0.5 mg d'hydroxyde d'aluminum. 3 injections Shrestha,et al 2007 N Engl J Med 356;9 Efficacité : 95,5% après 3 doses

Adresser les prélèvements au Centre national de référence du VHE Dr E Nicand Laboratoire de biologie HIA Val de Grâce Tel : 01 40 51 40 00 http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste

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